测定化学物对乙酰胆碱酯酶抑制毒性的微板吸光法研究

陶珊珊, 葛会林, 袁宏球, 阳辛凤. 测定化学物对乙酰胆碱酯酶抑制毒性的微板吸光法研究[J]. 生态毒理学报, 2018, 13(1): 201-209. doi: 10.7524/AJE.1673-5897.20171026001
引用本文: 陶珊珊, 葛会林, 袁宏球, 阳辛凤. 测定化学物对乙酰胆碱酯酶抑制毒性的微板吸光法研究[J]. 生态毒理学报, 2018, 13(1): 201-209. doi: 10.7524/AJE.1673-5897.20171026001
Tao Shanshan, Ge Huilin, Yuan Hongqiu, Yang Xinfeng. Microplate Absorbance-Based Toxicity Bioassay by Analysis of in Vitro Inhibition of Acetylcholinesterase[J]. Asian Journal of Ecotoxicology, 2018, 13(1): 201-209. doi: 10.7524/AJE.1673-5897.20171026001
Citation: Tao Shanshan, Ge Huilin, Yuan Hongqiu, Yang Xinfeng. Microplate Absorbance-Based Toxicity Bioassay by Analysis of in Vitro Inhibition of Acetylcholinesterase[J]. Asian Journal of Ecotoxicology, 2018, 13(1): 201-209. doi: 10.7524/AJE.1673-5897.20171026001

测定化学物对乙酰胆碱酯酶抑制毒性的微板吸光法研究

    作者简介: 陶珊珊(1994-),女,硕士研究生,研究方向为化学混合物毒理,E-mail:sarah133@126.com
  • 基金项目:

    国家自然科学基金(21607171);海南省应用技术研发与示范推广专项(ZDXM2014047,ZDXM20130043);海南省自然科学基金(213027)

  • 中图分类号: X171.5

Microplate Absorbance-Based Toxicity Bioassay by Analysis of in Vitro Inhibition of Acetylcholinesterase

  • Fund Project:
  • 摘要: 随着化学污染物种类与数量的日益增多,高通量测试方法显得越来越重要。基于乙酰胆碱酯酶(AChE)抑制法原理,以多功能酶标仪为测试设备,96孔微板为暴露反应载体,建立了测定化学物对AChE抑制毒性的微板吸光法。系统研究了AChE浓度、碘化硫代乙酰胆碱(ATCI)浓度、二硫代二硝基苯甲酸(DTNB)浓度对显色吸光度、吸光度变化速率、化学物测试毒性的影响。结果表明,随着AChE、DTNB、ATCI的浓度增加,吸光度均增加;吸光度变化速率与AChE浓度呈正相关,与DTNB浓度基本无关,与ATCI浓度呈现先增后减的双相关系;随着ATCI浓度增加,灭多威剂量-效应曲线(DRC)向右移动。最终建立的优化测试条件为DTNB 0.2 g·L-1、ATCI 0.2 g·L-1、AChE 0.04 U·mL-1、pH 6.8、反应温度29 ℃及暴露时间15 min;并与国标方法进行了对比与验证,发现试剂加样顺序对毒性测定结果有显著影响。基于AChE的微板毒性测试结果表明,灭多威的DRC呈现良好的S型曲线,可用Weibull函数有效表征,拟合决定系数R2大于0.97,空白变异控制在了±10%以内。此方法可用于化学污染物的高通量毒性检测。
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  • 施引文献:  0
出版历程
  • 收稿日期:  2017-10-26

测定化学物对乙酰胆碱酯酶抑制毒性的微板吸光法研究

    作者简介: 陶珊珊(1994-),女,硕士研究生,研究方向为化学混合物毒理,E-mail:sarah133@126.com
  • 1. 中国热带农业科学院分析测试中心 海南省热带果蔬产品质量安全重点实验室, 海口 571101;
  • 2. 华中农业大学植物科学技术学院, 武汉 430070
基金项目:

国家自然科学基金(21607171);海南省应用技术研发与示范推广专项(ZDXM2014047,ZDXM20130043);海南省自然科学基金(213027)

摘要: 随着化学污染物种类与数量的日益增多,高通量测试方法显得越来越重要。基于乙酰胆碱酯酶(AChE)抑制法原理,以多功能酶标仪为测试设备,96孔微板为暴露反应载体,建立了测定化学物对AChE抑制毒性的微板吸光法。系统研究了AChE浓度、碘化硫代乙酰胆碱(ATCI)浓度、二硫代二硝基苯甲酸(DTNB)浓度对显色吸光度、吸光度变化速率、化学物测试毒性的影响。结果表明,随着AChE、DTNB、ATCI的浓度增加,吸光度均增加;吸光度变化速率与AChE浓度呈正相关,与DTNB浓度基本无关,与ATCI浓度呈现先增后减的双相关系;随着ATCI浓度增加,灭多威剂量-效应曲线(DRC)向右移动。最终建立的优化测试条件为DTNB 0.2 g·L-1、ATCI 0.2 g·L-1、AChE 0.04 U·mL-1、pH 6.8、反应温度29 ℃及暴露时间15 min;并与国标方法进行了对比与验证,发现试剂加样顺序对毒性测定结果有显著影响。基于AChE的微板毒性测试结果表明,灭多威的DRC呈现良好的S型曲线,可用Weibull函数有效表征,拟合决定系数R2大于0.97,空白变异控制在了±10%以内。此方法可用于化学污染物的高通量毒性检测。

English Abstract

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